微滴式数字PCR（ddPCR）将反应体系分割为20000个纳米级微滴，每个微滴独立进行终点PCR扩增，通过泊松分布统计直接给出核酸分子的绝对定量数据——无需标准曲线，从根本上改变了法医学混合样本的定量分析模式。
技术原理
样品经微滴化处理后，每个微滴含0个或1个目标分子。PCR扩增后，荧光微滴计数，泊松校正得到拷贝数浓度。ddPCR对混合样本的核心贡献在于：①可直接计算主/次要贡献者的DNA绝对比例（而非相对比值）；②对PCR抑制剂耐受性强（微滴封闭性）；③可检测低至0.01%的微量混合成分。
与qPCR的对标优势
| 指标 | qPCR | ddPCR |
|---|---|---|
| 定量方式 | 相对定量（需标准曲线） | 绝对定量（无需标准曲线） |
| 低丰度检测 | ～1% | 0.01% |
| 抑制剂耐受 | 中等 | 强 |
| 变异系数 | 10-30% | <10> |
法医学应用场景
性侵混合样本中嫌疑人组分（<5>
局限
ddPCR的荧光通道数限制（通常2-4通道）使得多重检测能力弱于qPCR。高通量方面单次检测样本量受限（96孔板），不适合大量样本筛查。